血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)ELISA試劑盒

(用于血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))

(產(chǎn)品貨號：F03060)

原理

本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人VEGF 單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的VEGF與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗人VEGF，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，最后加終止液，在450nm處測OD值，VEGF濃度與OD值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中VEGF濃度。

試劑盒組成（2-8℃保存）

準(zhǔn)備試劑與收集血樣

1.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。

2.收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20℃或-70℃）保存，避免反復(fù)凍融。

3.標(biāo)準(zhǔn)品液配制：取8個1.5ml離心管，第一管加標(biāo)本稀釋液900ul，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在第一管中加入40ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出500ul，移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。

4.洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）

檢測程序

1.加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃40分鐘。

2.洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。

3.每孔加入蒸餾水和第一抗體工作液各50ul(空白除外)。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃20分鐘。

4.洗板：同前。

5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃10分鐘。

6.洗板：同前。

7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。

8.每孔加入100ul終止液混勻。

9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。

結(jié)果計算與判斷

1.所有OD值建議減除空白值后再行計算。如空白OD低于0.1，也可以直接計算。

2.以標(biāo)準(zhǔn)品4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0 pg/ml為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，使用軟件作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.根據(jù)樣品OD值計算出相應(yīng)VEGF含量。軟件可以向本公司郵件索取。

試劑盒性能

1.   靈敏度：最小的VEGF 檢測濃度小于30pg/ml。

2.特異性：可同時檢測重組或天然的人VEGF。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。

3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10％。

注意事項(xiàng)

1.   以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔，每次測定應(yīng)同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.   洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及OD值錯誤地升高。

3.   檢測時所有試劑都要恢復(fù)到室溫。板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。

4.   試劑盒使用超敏TMB溶液，若顯色過深會出現(xiàn)絮狀物，屬正常現(xiàn)象，不影響結(jié)果判讀。

5.   說明書中試劑盒組成為96T的量，48T的量應(yīng)減半！

6.   本試劑盒宜置4^oC冰箱保存。僅用于科研，不能用于臨床診斷！

以上說明書僅供參考！實(shí)際以試劑盒內(nèi)的說明書為準(zhǔn)！