人白介素-2(IL-2)ELISA試劑盒

(產(chǎn)品貨號(hào)：F01260)

原理

本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人IL-2 單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的IL-2與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗人IL-2，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，最后加終止液，在450nm處測(cè)OD值，IL-2濃度與OD值成正比，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中IL-2濃度。

試劑盒組成（2-8℃保存）

準(zhǔn)備試劑與收集血樣

1. 10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。

2. 收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)，2-8℃保存48小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20℃或-70℃）保存，避免反復(fù)凍融。血清、血漿用血液校正液作2倍稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品和其他樣品可用標(biāo)本稀釋液稀釋。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制：取8個(gè)1.5ml離心管，第一管加標(biāo)本稀釋液900ul，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在第一管中加入4000pg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出500ul，移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對(duì)照。

4. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）

檢測(cè)程序

1. 加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃40分鐘。

2. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。

3. 每孔加入蒸餾水和第一抗體工作液各50ul(空白加100ul水)。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃20分鐘。

4. 洗板：同前。

5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃10分鐘。

6. 洗板：同前。

7. 每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。

8. 每孔加入100ul終止液混勻。

9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。

結(jié)果計(jì)算與判斷

1. 所有OD值建議減除空白值后再行計(jì)算。如空白OD低于0.1，也可以直接計(jì)算。

2. 以標(biāo)準(zhǔn)品400、200、100、50、25、12.5、6.25、0 pg/ml為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，使用軟件取四參數(shù)多項(xiàng)式作圖，畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3. 根據(jù)樣品OD值計(jì)算出相應(yīng)IL-2含量，再乘上稀釋倍數(shù)即可。軟件可以向本公司郵件索取。

試劑盒性能

1.   靈敏度：最小的IL-2 檢測(cè)濃度小于2pg/ml。

2. 特異性：可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人IL-2。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。

3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10.1％。

注意事項(xiàng)

1.   檢測(cè)時(shí)所有試劑都要恢復(fù)到室溫。板條開(kāi)封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。

2. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔，每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3. 樣品量不夠時(shí)，可將第一步標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的加樣量減少至30ul！其他步驟不變。

4.   如果樣品含量較低，可將樣品孵育時(shí)間從37℃40分鐘改為4度過(guò)夜以提高靈敏度。

5.   洗滌過(guò)程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。

6.   黏稠、脂血癥、黃疸或溶血的樣品可能會(huì)干擾該測(cè)定。高水平的血清白蛋白可能會(huì)干擾該測(cè)定。

7.   本試劑盒宜置4^oC冰箱保存。僅用于科研，不能用于臨床診斷！

以上說(shuō)明書(shū)僅供參考！實(shí)際以試劑盒內(nèi)的說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)！